محلول فایکول چیست؟
محلول فایکول (Lymphosep, Lymphocyte Separation Media) محلول استاندارد آزمایشگاهی بی رنگ و استریل شامل نسبت مناسبی از پودر فایکول و سدیم دیاتروزوات است. از لحاظ شیمیایی ، يك پلي ساكاريد خنثی ، بسیار منشعب ، دارای جرم زیاد، هيدروفيل ( به راحتی در آب حل می شود ) ،با دانسیته های مختلف ( 1.077 و 1.084 ) و شعاع 7-2 نانومتر می باشد .
کاربرد محلول فایکول
- جداسازی لنفوسیت های B ،T از خون محیطی مغز استخوان و خون بند ناف در مطالعات آزمایشگاه
- جداسازی سلول های تک هسته ای (PBMC) با استفاده از محلول فایکول ( با دانسيته 1.077 )
روش کار
جداسازی سلولهای تک هسته‌ای خون محیطی با استفاده از فایکول و گرادیان شیب غلظت انجام می گیرد .
مراحل :
1.2- ابتدا 10 میلی‌لیتر خون محیطی همراه با ضد انعقاد جمع‌آوری می گردد.
2.2- خون به نسب برابر با PBS رقیق می شود .
3.2- محلول حاصل بر روی فایکول (به طوری که به صورت دو لایه جدا از هم قرار گیرند )ریخته شده و با دور 2500 به مدت 20-25 دقیقه سانتریفوژ می گردد.
(چگالي لیمفوسپ بيشتر از چگالي لنفوسيت ها و كمتر از چگالي اريتروسيت ها و گرانولوسيت ها است. پس از سانتريفيوژ كردن اريتروسيت ها و نوتروفيل ها از ميان لیمفوسپ ها عبور كرده و در زير آن ، در كف لوله قرار ميگيرند؛ در حاليكه سلولهاي PBMC در سطح مشترك پلاسماي غني از پلاكت ولیمفوسپ قرار ميگيرند.)
4.2- سلول های تک هسته‌ای جدا شده با PBS شستشو داده می شود .
5.2- رسوب سلولی حاصل در محیط غنی شده RPMI همراه با 10% سرم و 1% آنتی‌بیوتیک (پنی‌سیلین استرپتومایسن) به‌صورت سوسپانسیون در می آید .
3- استفاده از لیمفوسپ یا لیمفوسایت سپریشن مدیا در درمان دیابت نوع یک
در ابتدای شروع تحقیقات برای درمان دیابت با پیوند ، Ficoll برای جداسازی جزایر لانگرهانس از بافت پانکراس هضم شده با آنزیم (کلاژناز) مورد استفاده قرار گرفت . براساس این نظریه جزایر جدا شده می توانند برای پیوند به بیماران مبتلا به دیابت نوع 1 استفاده شوند.
(در عمل ، هنگام استفاده از لیمفوسپ جهت ایجاد پیوند ایمن و موثر جزایر در انسان ، به دلیل بازیابی جزایر از بافت اصلی ، اشکالاتی در تهیه یک آماده سازی خالص از جزایر به وجود خواهد آمد )
سوالات متداول
Ficoll-Paque.1 چیست ؟
Ficoll بخشی از Ficoll-Paque است که در آزمایشگاه های زیست شناسی برای جداسازی خون به اجزای آن (گلبول های قرمز ، لکوسیت ها و غیره) استفاده می شود.
Ficoll-Paque معمولاً در انتهای یک لوله مخروطی قرار می گیرد و سپس خون به آرامی در بالای Ficoll-Paque لایه بندی می شود. پس از سانتریفیوژ، لایه های زیر در لوله مخروطی از بالا به پایین قابل مشاهده است: 1.پلاسما و سایر اجزاء ، 2.لایه ای از سلولهای تک هسته ای به نام بوفی (PBMC/MNC) ، 3.فیکول-پاک ، 4. گلبولهای قرمز و گرانولوسیتها ( که باید به شکل گلوله موجود باشد ). این جداسازی اجازه برداشت آسان PBMC ها را می دهد.
2.چرا Ficoll به نور حساس است؟
از آنجا که دیاتریزوات سدیم به نور حساس است ، Ficoll-Paque PLUS باید در برابر نور محافظت شود.
3.آیا فیکول برای سلول ها سمی است؟
قرار گرفتن طولانی مدت در معرض Ficoll-Hypaque برای سلول ها سمی است و سانتریفیوژ گرادیان فقط در مواقع ضروری انجام می شود.
4.چگونه می توان شیب Ficoll را ایجاد کرد؟
*ابتدا نمونه خون را داخل لوله جمع آوری خون هپارین به آرامی همگن می کنیم .
*سپس خون کامل را به لوله مخروطی حاوی 4 میلی لیتر PBS اضافه می کنیم . (حجم برابر با نمونه ؛ 1: 1)
*در نهایت محلول را همگن یا مخلوط کرده و به یک لوله مخروطی جدید حاوی 4 میلی لیتر محلول فیکول اضافه می کنیم .
5.آیا هیستو پاک فیکول است؟
Histopaque را می توان به عنوان Ficoll Histopaque یا Ficoll-Paque یا Ficoll Hypaque نامگذاری کرد.