محلول تريپسين ادتا 0.25% trypsin edta

محلول تريپسين ادتا 0.025% trypsin edta

trypsin EDTA – Solution Sigma-Aldrich 0.25%

محلول تريپسين ادتا 0.25% trypsin edta پروتئازی است که از پانکراس خوک تهيه می شود.

این آنزیم یک پروتئین تک زنجیره حاوی223 اسید آمینه است که محل اصلی فعالیت آن زنجیره جانبی دارای لیزین و آرژنین با بار مثبت مي باشد. تریپسین غالبا زنجیره های پپتیدی را از سمت عامل کربوکسیل لیزین و آرژنین می شکند.

كاربرد تریپسین ادتا :

1.جداسازی سلول های متصل به فلاسک

2. جدا کردن سلول ها از یکدیگر

3. شکست پیوندهای استری و آمیدی در مشتقات سنتتیک اسیدهای آمینه شود.

4.به عنوان عامل شلاته کننده اغلب برای افزایش فعالیت آنزیماتیک تریپسین افزوده می شود. EDTA از طریق خنثی کردن یونهای کلسیم و منیزیم که باعث افزایش اتصال سلول به سلول می شوند عمل می کند.

نکات

• مهارکننده های سرین پروتئاز، مانند DFP، TLCK، APMSF، AEBSEF، و آپروتینین، تریپسین را مهار می کنند.
• غلظت تریپسین مورد نیاز برای جدا کردن سلولها از سوبسترا، ابتدائا به نوع سلول، سن کشت، و تراکم کشت های سلول بستگی دارد.
• این محصول بصورت منجمد در دمای 10- تا 40- درجه سانتیگراد نگهداری می شود. از فریز و ذوب کردن مکرر اجتناب کنید.
• محلول تريپسين ادتا فنل رد است. به دلیل اینکه بر روی یخ خشک منتقل می شود ممکن است مقدار قابل توجهی دی اکسید کربن در داخل بسته باشد. این دی اکسید کربن ممکن است به محلول نفوذ کرده و pH آن را کمی کاهش داده و باعث تغییر رنگ آن از صورتی به نارنجی شود. محلول نارنجی هنوز قابل استفاده است، یا می توان با بیکربنات سدیم pH آن را تنظیم کرد.
• انکوبه کردن مدت طولانی سلول ها با غلظت های خیلی بالای تریپسین می تواند باعث آسیب به غشاء سلولی و در نتیجه مرگ سلول شود.
• محلول کردن تریپسین یا رقیق سازی آن از یک محلول غلیظ، باید با یک محلول نمک بافری فاقد کلسیم یا منیزم انجام شود.
• محلول های تریپسین باید شفاف و عاری از هر گونه ذرات معلق باشد. در صورتی که محلول کدر بوده یا حاوی ذراتی معلق و یا رسوب است از آن استفاده نکنید. شواهد دیگر تخریب، شامل کاهش خصوصیات فیزیکی یا عملکردی است.

روش استفاده از تریپسین ادتا 

• به وسیله از پیپت، محیط استفاده شده را از ظرف کشت خارج کنید.
• با افزودن بافر نمکی متعادل (PBS) فاقد کلسیم و منیزیم (BI-1401) به کناره فلاسک در سمت مقابل سلولها، تک لایه سلولی را شستشو دهید.
• با تکان دادن آهسته فلاسک به مدت 1 تا 2 دقیقه، لایه سلولی را شستشو داده و محلول شستشو را دور بریزید.
• محلول تریپسین-EDTA 25% ( (BI-1602) را از سمت مقابل سلولها به کناره فلاسک بیفزایید.، میزان محلول تریپسین مورد استفاده باید به اندازه ای باشد که روی لایه سلولی را بپوشاند.
• فلاسک را به آرامی تکان داده تا مطمئن شوید که محلول جداسازی، کل لایه سلولی را پوشانده است.
• فلاسک را به مدت 2 تا 3 دقیقه در 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید. روند جداسازی را با قرار دادن فلاسک زیر میکروسکوپ اینورت بررسی کنید. زمانی که جداسازی کامل شود، سلول ها معلق بوده و گرد به نظر می رسند. علاوه بر تکان دادن آرام، در مورد فلاسک های رده سلولی که بطور مشخص جداسازی آنها از لایه زیرین مشکل است ضربه زدن باعث تسریع جداسازی می شود.

نکته: توجه داشته باشید که زمان دقیق مورد نیاز برای جداسازی سلول ها، بر اساس رده سلولی متفاوت است. فرایند جداسازی باید به طور پیوسته ،کنترل و نظارت شود تا از آسیب سلول ها جلوگیری كند.

• به محض تکمیل جداسازی سلول، سرم حاوی محیط کامل را به فلاسک بیفزایید تا تریپسین را مهار کرده و از تخریب بیشتر سلول ها جلوگیری کند.
• سلول ها را با پیپت کردن مکرر از هم جدا کرده و بصورت یک سوسپانسیون سلولی واحد درآورید.
• سلول ها را شمارش کرده و ساب کالچر دهید.

ويژگي محصول :

• ظاهر: قرمز، محلول شفاف
• پی اچ: 7.4 – 7.6
• عمر مفید: 12 ماه

شرایط نگهداری

• به محض دریافت، محصول را در دمای 20- درجه سانتیگراد فریز کنید. بعد از ذوب شدن، محصول برای حدود 2 هفته در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد پایدار است.
• فریز و ذوب کردن مکرر محصول موجب کاهش فعالیت آنزیمی می شود، بنابراین از این کار اجتناب کنید. بعد از ذوب شدن، محلول را در حجم های کوچکتر تقسیم کرده و برای استفاده های بعدی در فریزر نگهداری نمایید

برای اطلاع از قیمت فروش یا خرید محصول از طریق اطلاعات صفحه تماس با ما در ارتباط باشید.