پلاسمای EDTA خرگوش 1 سی سی Tcell

پلاسمای EDTA خرگوش، برای شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس با آزمایش کواگولاز. EDTA موجود در آن به حذف موارد مثبت کاذب کمک می کند.

عملکرد:

کواگولاز آنزیمی است که توانایی انعقاد پلاسما را دارد. استافیلوکوکوس اورئوس دو نوع کواگولاز را تشکیل می دهد. کواگولاز آزاد یک آنزیم خارج سلولی است، کواگولاز محدود شده روی سطح دیواره سلولی قرار دارد. هر دو آنزیم در آزمایش لوله شناسایی می شوند. با آزمایش اسلاید، فقط کواگولاز متصل شده را می توان تشخیص داد.

روش عملکرد:

کشت یک شبه آبگوشت استاف. اورئوس با پلاسمای خرگوش EDTA هیدراته شده انکوبه می شود. اگر بیش از سه چهارم محتویات لوله یک لخته منسجم تشکیل دهد، آزمایش کواگولاز مثبت است.

نگهداری پلاسمای EDTA خرگوش:

کواگولاز به مدت 5 روز در شرایط محلول (هیدراته مجدد) در دمای 2+ تا 8+ درجه سانتی گراد پایدار است. در دمای 20- درجه سانتیگراد تا 30 روز پایدار است.

دفع ایمن:

محتویات لوله شامل باکتری است و باید به طور ایمن دفع شود. این کار را می توان با اتوکلاو کردن یا قرار دادن در محلول 5-6 درصد ضد عفونی کننده به مدت حداقل 6 ساعت انجام داد.

روش انجام آزمایش:

1.  آزمایش کواگولاز را روی 5 کلنی معمولی و یا 5 کلنی معمولی روی آگار یا 5 کلنی مشکوک از سایر محیط های کشت انجام دهید.
2.  هر یک از کلنی های انتخاب شده را با یک حلقه تلقیح استریل به لوله های کشت جداگانه حاوی آبگوشت قلب مغز منتقل کنید.
3.  پلاسمای خرگوش EDTA خشک شده منجمد را در 3 میلی لیتر آب مقطر یا غیر معدنی حل کنید.
4. 0.3 میلی‌لیتر کواگولاز هیدراته شده را با استفاده از یک پیپت استریل در یک لوله کشت استریل پیپت کنید.
5. 0.1 میلی‌لیتر از کشت براث مغز-قلب 1/2 حلقه تلقیح مواد کلنی را با 0.3 میلی‌لیتر پلاسما مخلوط کرده و در حمام آب در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید (مواد کلنی مستقیماً از آگار مانیتول-کلرید سدیم-فنول قرمز). برای آزمایش مناسب نیست، ابتدا کشت براث قلب مورد نیاز است.
6.  هر ساعت، محتویات لوله را از نظر انعقاد بررسی کنید و به آرامی به پهلو بچرخانید (نه با تکان دادن)
7. اگر تست بعد از 4-6 ساعت منفی بود، انکوباسیون لوله را ادامه دهید و بعد از 24 ساعت ارزیابی نهایی را انجام دهید. برای کنترل منفی، آبگوشت قلب مغز تهیه کنید، اما تلقیح نکنید. نباید هیچ علامتی از لخته شدن وجود داشته باشد. برای کنترل مثبت، آزمایش را با سویه استافیلوکوک مثبت کواگولاز انجام دهید.